Bakteri terbukti mengembangkan resistensi terhadap sebagian besar antibiotik yang tersedia secara komersial, dan pembentukan biofilm menghambat jangkauan antibiotik tersebut ke organisme target. Dalam studi ini, kami memiliki nanopartikel seng oksida (ZnO) sintesis hijau menggunakan ekstrak bunga Calendula officinalis dan merangkum nanopartikel di dalam polimer biokompatibel, polietilen glikol (PEG) (PEG-ZnO-CO). Analisis fitokimia dan analisis kromatografi gas-spektrometri massa (GC-MS) dilakukan untuk mengetahui komponen ekstrak bunga. Nanopartikel PEG-ZnO-CO dikarakterisasi menggunakan teknik berbeda seperti spektrofotometri UV-vis, hamburan cahaya dinamis (DLS), potensial zeta, spektroskopi inframerah transformasi Fourier (FTIR), difraktometri sinar-X (XRD), mikroskop elektron transmisi (TEM), pemindaian mikroskop elektron (SEM), dan analisis spektroskopi sinar-X dispersif energi (EDX). Biokompatibilitas nanopartikel juga dipantau menggunakan uji MTT, uji hemolisis, dan studi embrio ikan zebra untuk analisis in vitro dan in vivo. Terakhir, aktivitas penghambatan biofilm dinilai untuk S. aureus dan Pseudomonas sp. Hasil penelitian menunjukkan diameter hidrodinamik nanopartikel menjadi 130 nm; TEM menunjukkan ukuran nanopartikel ZnO menjadi 6,7 nm. Gambar SEM menunjukkan morfologi bola; potensi zeta adalah −10,47 mV, menunjukkan stabilitas sedang. Celah pitanya adalah 2,29 eV, menunjukkan sifat semikonduktor yang sempurna. Massa biofilm adalah 0,58 ± 0,03 mg setelah 100 μg/mL perlakuan PEG-ZnO-CO dibandingkan dengan 0,65 ± 0,05 mg pada kontrol yang tidak diobati untuk S. , massa biofilm setelah 100 μg/mL perlakuan PEG-ZnO-CO adalah 0,58 ± 0,045 mg dibandingkan dengan 0,68 ± 0,05 mg untuk kontrol yang tidak diberi perlakuan. Nanopartikel PEG-ZnO-CO bersifat biokompatibel hingga dosis 50 μg/mL dan menunjukkan kapasitas penghambatan biofilm yang moderat. Penelitian lebih lanjut diperlukan di masa depan untuk mengeksplorasi aktivitas antimikroba dengan strain mikroba lainnya